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Diagnóstico do Metapneumovirus aviário - Determinação dos anticorpos

A análise de amostras de soro em intervalos determinados (por exemplo, no momento da presença dos sinais clínicos e 2-3 semanas depois) é a base para o diagnóstico sorológico.  Isto também é aplicável para a verificação dos resultados da vacinação.

Aves vacinadas com vacinas vivas e inativadas deverão ter os títulos de anticorpos nas faixas mais altas.  Em frangos/galinhas podem ser encontrados níveis altos de anticorpos sem a presença de problemas, o que cria duvidas quanto às vantagens da sorologia para o diagnóstico das infecções nesse tipo de aves. 

Os métodos que podem ser utilizados para a determinação de anticorpos são:

1. Prova de neutralização viral (VN)
2. Prova de Imuno Ensaio Enzimático (ELISA, do inglês: "Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay”)

Prova de vírus neutralização (VN)

O soro é misturado com cepas conhecidas do MPV, as quais foram cultivadas em ovos embrionados, cultivos de anéis de traquéia ou cultivos celulares. A inibição no crescimento do vírus permite a identificação dos anticorpos.  A prova de vírus neutralização é feita com uma concentração constante do vírus contra uma série de diluições na base dois do soro suspeito (o chamado método β).  O título é calculado baseado na maior diluição do soro que neutraliza a infectividade do vírus.

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Prova de Imunoensaio Enzimático

(ELISA : do inglês “Enzyme linked Immuno Sorbent Assay”)

Anticorpos específicos do soro se unem ao vírus. O complexo é detectado por uma anti-y-globulina marcada com uma enzima.  Após da adição de um substrato para a enzima, pode se medir a reação pela produção de uma mudança de cor.

Este é o método mais comumente usado para a determinação dos anticorpos contra o MPV e existe uma série de kits comerciais disponíveis no mercado.  Trata-se de uma prova conveniente, por permitir a confirmação da resposta adequada de lotes vacinados.  No entanto, a eleição da cepa de MPV usada como antígeno parece ser importante.  Os ELISA baseados nos subtipos A ou B, detectam bem os anticorpos induzidos pelos subtipos A e B, mas detectam em menor grau, os anticorpos heterólogos.  Os ELISAs comerciais podem ou não ser suficientemente sensíveis para a detecção de anticorpos de outros subtipos heterólogos (C ou D).

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